激光共聚焦显微镜是一种结合了激光技术、光学技术和计算机图像处理技术的**显微镜,广泛应用于生物、材料科学等领域。其结构复杂而精密,主要包括以下几个部分:
1. 激光光源
作用:提供高强度、单色性好的激光束作为照明光源。
常用激光器:包括半导体激光器(如405nm近紫外谱线)、氩离子激光器(如457nm、477nm、488nm、514nm蓝绿光)和氦氖激光器(如543nm绿光、633nm红光)等。
2. 扫描装置
组成:扫描模块主要由针孔光栏、分光镜、发射荧光分色器和检测器等组成。
功能:控制激光束在样品表面进行逐点扫描,形成光学切片。
针孔光栏:控制光学切片的厚度,确保只有焦平面上的光信号通过。
分光镜:按波长改变光线传播方向,将激发光和荧光分离。
3. 荧光显微镜系统
作用:作为显微镜的主体部分,负责样品的成像。
特点:需与扫描器连接,使激光能进入显微镜物镜照射样品,并使样品发射的荧光到达检测器。同时,需具备光路转换装置,以实现汞灯与激光之间的转换。
物镜选择:应选取大数值孔径平场复消色差物镜,有利于荧光的采集和成像的清晰。
4. 检测器
常用类型:光电倍增管(PMT)或雪崩光电二极管。
功能:接收经探测针孔聚焦后的荧光信号,并将其转换为电信号。
5. 计算机系统
组成:包括数据采集、处理、转换和应用软件等部分。
功能:控制各部件的协调工作,接收检测器输出的电信号,进行图像处理和显示。同时,提供用户界面,方便用户进行操作和数据分析。
6. 图像输出设备
作用:将处理后的图像显示在屏幕上或打印出来。
常见设备:彩色显示器、打印机等。
7. 光学装置和共聚焦系统
共聚焦原理:采用共轭聚焦原理和共轭聚焦装置,确保光源和探测器前方的针孔(照明针孔和探测针孔)几何尺寸一致且共轭,从而过滤掉焦平面以外的光信号干扰。
功能:提高成像的分辨率和清晰度,实现光学断层扫描和三维图像重建。
8. 辅助设备
风冷、水冷冷却系统:用于降低激光器和其他发热部件的温度,保证设备的稳定运行。
稳压电源:提供稳定的电源供应,避免电压波动对设备造成损害。
综上所述,激光共聚焦显微镜的结构复杂而精密,各部分相互配合、协调工作,共同实现高清晰度、高分辨率的成像功能。