激光共聚焦显微镜作为一种高分辨显微镜,对测试的样品有一定的要求,这些要求确保了测试的准确性和仪器的正常运行。以下是对激光共聚焦显微镜测试样品要求的详细归纳:
一、生物样品要求
荧光表达:生物样品应先在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常,以确定是否有必要使用激光共聚焦显微镜。
盖玻片厚度:盖玻片厚度要求≤0.17mm,以确保激光能够穿透并正确聚焦在样品上。
激发与发射波长:需要明确样品的激发波长和发射波长,以便选择合适的激光器和荧光染料。
扫描参数:对于需要重构的样品,需要明确扫描区域大小、位置和Z步进等参数,这些参数会影响测试时间。
样品固定:共聚焦显微镜测试的标本需要贴壁良好,不能悬浮起来,需要在载玻片上固定好后进行测试。
抗荧光淬灭:做显微成像时,样品需要加抗荧光淬灭剂,以防止荧光信号丢失。
二、材料样品要求
样品制备:主要测试偏材料的样品,需要提前制备好。
样品尺寸:样品拍出来*大面积为1.11×1.8mm到5×5mm范围内,颜色可调。样品的尺寸没有严格要求,但B须平整,以确保激光能够均匀照射。
三、通用要求
荧光探针标记:样品需经荧光探针标记(单标、双标、三标),以便激光共聚焦显微镜能够检测到荧光信号。
载玻片要求:载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,且表面应光洁、厚度均匀,没有明显的干扰荧光。
样品厚度:样品不能太厚,如果太厚,激发光大部分会消耗在样品下部,而物镜直接观察到的上部不能充分激发。
封片剂选择:封片剂常用PH8.5~9的PBS配制的甘油封片,或使用抗荧光淬灭的封片剂,以减少荧光信号丢失。
综上所述,激光共聚焦显微镜对测试的样品有一定的要求,这些要求涉及样品的荧光表达、盖玻片厚度、激发与发射波长、扫描参数、样品固定、抗荧光淬灭、荧光探针标记、载玻片要求、样品厚度以及封片剂选择等方面。这些要求确保了测试的准确性和仪器的正常运行。